25-羥基維生素D2 和25-羥基維生素D3 （統稱為25-羥基維生素D） 的血清水平是維生素D營養狀況的指標，報道表明這兩種形式的維生素D在生物活性和生物利用率上可能存在差異。研究顯示25-羥基維生素D 的低水平與各種疾病相關，諸如成人骨軟化和兒童軟骨病、腫瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、代謝綜合癥等。因此，維生素D的檢測在臨床上得到大量的應用。